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      談談酶標儀使用光柵和濾光片的區別

      點擊次數:9  發布時間:2022-07-04
        酶標儀是對酶聯免疫檢測實驗結果進行讀取和分析的專業醫療設備,廣泛地應用在臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中。酶標儀分類方式一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進行劃分。酶標儀按照濾光方式的不同可分為:濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀。
       
        酶標儀濾光片原理:
       
        濾光片是光學玻璃片鍍制光學膜層。當加入光學膜層后,關于光的干涉原理,濾光片的折射率發生了變化,使濾光片對波長的通過有了變化。例如一個485/20nm的濾光片可以讓475nm到495nm波長的光通過,在這個波長范圍以外的光就會被擋住和吸收。
       
        在酶標儀內,光源會從氙燈或鹵鎢燈發出,通過特定的濾片,把不需要的波長隔開,然后再照射到樣本中。樣本中的熒光染料會被激發,放出發射光,再透過特定的濾片把雜光隔開,然后被檢測器收集。這就是濾光片系統酶標儀的熒光檢測過程。
       
        酶標儀光柵的原理:
       
        為解決濾光片系統不可隨時改變波長的問題,光柵型酶標儀就應運而生。它是使用物理性衍射光柵原理在不同的角度把白光光源分開成獨立的波長,之后再經過一系列的狹縫把已選取的激發波長分出來,并照射到樣本上。樣本的發射光也被同樣的原理去分隔出需要的波長,最后被檢測器接收和量度。

      酶標儀濾光片

       


       
        光柵和濾光片的區別比較:
       
        a、酶標儀光的純度區別比較:
       
        光電檢測以采用純度高的光為佳,但不管采用哪種分光器,都不可能得到絕對純的光。
       
        1、光柵:就光柵分光后的一點而言,光是純的,但由于透光孔具有一定寬度,比色皿所接受的光,是一個在指定波長附近波段上的等強的光。
       
        2、濾光片:經濾光片分光后,通過透光孔被比色皿所接受的光也是一個波段,但在指定波長上光的強度最高,呈正態分布。
       
        b、酶標儀光的穩定性區別比較:
       
        1、光柵:棱鏡或者光柵片的繞軸旋轉,由于不可避免的機械誤差,并且小角度的偏差經過2-3次反射,會造成很大的偏差,造成波長的不穩定。另外光柵是窄縫,其能量也會很弱,小的檢測電壓信號為了獲得大的電壓值,必須以大倍數放大,這樣誤差也會被放大,會造成檢測的不穩定
       
        2、濾光片:由于從同一濾光片上每一點透過的光的波長都是相同的,每個位置是通過光偶準確定位,不受儀器本身機械誤差的影響,所以,光強經會聚后,能量很高,電壓信號也會相對強,主流光很強,其它雜光的影響就會很弱很弱,可以忽略到不計,誤差也會很小,光是穩定的,檢測相對很穩定。
       
        c、酶標儀設備后期維護區別:
       
        1、光柵: 一旦出現螺絲松動,傳動誤差,更換燈泡,造成中心波長偏移,那一般很難再調整回合適位置,必須由專業廠家來用專業設備調試完成,事實上國內大多數用戶因為沒有得到這方面的培訓與告知,所以基本用了一年以后,發生了偏差也不會去找廠家去校準了。
       
        2、濾光片:結構簡單,便于維護。只要稍加培訓即可完成維護。
       
        d、酶標儀儀器檢測靈敏度區別:
       
        1.濾光片具有非常好的透光率 (可高于85%),也就是說光能量的損失比較少。如下圖(圖1),在一個熒光檢測中,經過濾光片進入樣本的激發光和從樣本透過濾光片進入檢測器的發射光都只有少量的損失(大約10%)。光的損失較少,光的能量自然較大,熒光的信號自然很容易檢測。這是獲得高信噪比(SNR)的最初始保證。所以,由于有高的信噪比(SNR)保證,濾光片系統從酶標儀誕生以來一直就是高靈敏度檢測的黃金標準。我們也不難發現很多有光柵型酶標儀的廠家在一些檢測靈敏度要求比較高的高端應用(如:TRF、TR-FRET、等)中,都會有另外配上濾光片模塊的設計。因為這些高端的應用,光柵系統未能有滿意的效果或干脆做不到。
       
        2.光柵系統帶來方便,但也有一些缺點?;诠饴吩O計的問題,光柵的光能損失比濾片大很多。在熒光檢測中,光源經過光柵而成的激發光已比原來的少了能量。樣本被激發后會放出發射光,發射光會透過光柵去分隔出需要的波長。被分隔后的發射光能量再損失。光柵酶標儀的靈敏度沒有濾光片酶標儀好的,所以在高端光柵型的酶標儀也要配備濾光片模塊才能進行TRF、TR-FRET等高靈敏度需求的檢測。
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